Selam! Ben bir FMOC tedarikçisiyim - onun - AIB - OH TFA ve bugün bu bileşiğin saflaştırılması için boyutu nasıl optimize edeceğiniz hakkında konuşmak istiyorum. Boyut - Jel - filtrasyon kromatografisi olarak da bilinen dışlama kromatografisi, FMOC - HIS - AIB - OH TFA gibi peptitlerin saflaştırılmasında yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Molekülleri boyutlarına göre ayırır, bu da saf bir ürün almaya çalışırken süper kullanışlıdır.
Öncelikle, boyut - dışlama kromatografisinin temellerini anlayalım. Bu kromatografideki sabit faz gözenekli boncuklardan oluşur. Daha küçük moleküller bu gözeneklere girebilirken, daha büyük olanlar yapamaz. Sonuç olarak, daha büyük moleküller kolondan daha hızlı geçer ve daha küçük olanların elutası daha uzun sürer. Elüsyon süresindeki bu fark, farklı boyutlu molekülleri ayırmamızı sağlar.
FMOC - HIS - AIB - OH TFA arındırma söz konusu olduğunda, süreci optimize etmek için dikkate almamız gereken birkaç faktör vardır.
1. sütun seçimi
Sütun seçimi çok önemlidir. Doğru gözenek boyutuna sahip bir sütun seçmelisiniz. Gözenekler çok büyükse, FMOC - HIS - AIB - OH TFA molekülleri bunlara girebilir, bu da elüsyonlarını yavaşlatacak ve ayırma verimliliğini etkileyecektir. Öte yandan, gözenekler çok küçükse, bileşik sabit faz ile düzgün etkileşime giremeyebilir ve iyi bir ayrılık elde edemezsiniz.
Çapraz bağlantılı dekstran, agaroz veya poliakrilamid gibi farklı sütun türleri vardır. Her birinin kendi özellikleri vardır. Örneğin, dekstran tabanlı sütunlar küçük ila orta boy molekülleri ayırmak için mükemmeldir. FMOC - HIR - AIB - OH TFA gibi belirli bir bileşikle uğraşırken faydalı olabilen nispeten dar bir ayırma aralığına sahiptirler.
2. Mobil aşama
Mobil faz, numuneyi kolondan taşıyan sıvıdır. Hem numune hem de sabit faz ile uyumlu bir mobil aşama seçmeniz gerekir. FMOC - HIS - AIB - OH TFA için, ortak bir seçim sulu bir tampondur. Tamponun pH'ı önemlidir. PH çok yüksek veya çok düşükse, sabit faz ile etkileşimlerini değiştirebilecek FMOC - HIS - AIB - OH TFA moleküllerinin yükünü etkileyebilir.
Ayrıca tamponun iyonik mukavemetini de göz önünde bulundurmanız gerekir. Sağ iyonik mukavemete sahip bir tampon, numune ve kolon arasında spesifik olmayan etkileşimleri önlemeye yardımcı olabilir. Örneğin, tampona az miktarda tuz eklemek elektrostatik etkileşimleri azaltabilir. Ancak, ayrılmayı da etkileyebileceği için çok fazla tuz eklememeye dikkat edin.
3. Örnek yükleme
Sütuna ne kadar örnek yüklediğiniz çok önemlidir. Çok fazla yüklerseniz, sütun aşırı yüklenebilir. Bu, moleküllerin sabit faz ile düzgün etkileşim kurmak için yeterli zamana sahip olmayacağından zayıf ayrılmaya yol açabilir. Öte yandan, çok az yüklerseniz, saflaştırılmış üründen yeterince alamayabilirsiniz.
İyi bir kural, az miktarda numune ile başlamak ve ayırma kalitesini izlerken yükü kademeli olarak arttırmaktır. Ana sütuna girmeden önce numunedeki büyük parçacıkları veya agregaları çıkarmak için bir ön kolon da kullanabilirsiniz. Bu, ana sütunun korunmasına ve ayırmayı iyileştirmeye yardımcı olabilir.
4 akış hızı
Akış hızı, mobil fazın sütundan geçme hızıdır. Akış hızı çok hızlıysa, moleküllerin sabit fazla etkileşime girmesi için yeterli zamanları olmayacak ve ayırma zayıf olacaktır. Akış hızı çok yavaşsa, numuneyi elüte etmek uzun zaman alacaktır ve aynı zamanda bant genişlemesine de neden olabilir.
Belirli sütun ve numuneniz için en uygun akış hızını bulmanız gerekir. Genellikle, nispeten düşük bir akış hızıyla başlamak ve daha sonra ayırma sonuçlarına göre ayarlamak iyi bir fikirdir. Deney boyunca sabit bir akış hızı korumak için bir akış kontrolörü de kullanabilirsiniz.
5. Sıcaklık
Sıcaklık ayrıca boyut - hariç tutma kromatografisi olarak ayrılmayı da etkileyebilir. Genel olarak, daha yüksek bir sıcaklık moleküllerin difüzyon oranını arttırabilir, bu da ayrılmayı iyileştirebilir. Bununla birlikte, FMOC - HIS - AIB - OH TFA'nın bozulmasına neden olabileceğinden, numuneyi çok fazla ısıtmamaya dikkat etmeniz gerekir.
Çoğu zaman, oda sıcaklığı iyi bir başlangıç noktasıdır. Ancak ayrımın yeterince iyi olmadığını fark ederseniz, sıcaklığı biraz artırmayı deneyebilir ve bir fark yaratıp yaratmadığını görebilirsiniz.
Şimdi, ilgili bazı bileşikler hakkında konuşalım. Diğer peptit ara maddelerle ilgileniyorsanız, ayrıcaBoc - onun (trt) - aiB - oh-FMC - L - Lys - (OTB) - Glu - (OTB - (OTB) - EVET - OEE - OE, VeFMOC - Gly - Arg (PBF) - OH. Bu bileşikler çeşitli peptitlerin sentezinde kullanılır ve benzer kromatografi teknikleri kullanılarak saflaştırılabilir.
Sonuç olarak, FMOC - HIS - AIB - OH TFA'nın saflaştırılması için boyut - dışlama kromatografisi optimize etmek, sütun seçimi, mobil faz, numune yükleme, akış hızı ve sıcaklık dahil olmak üzere çeşitli faktörlerin dikkatle değerlendirilmesini gerektirir. İnce - Bu parametreleri ayarlayarak, yüksek kaliteli bir ayrılık elde edebilir ve saf bir ürün elde edebilirsiniz.
FMOC - HIS - AIB - OH TFA veya bahsettiğim ilgili bileşiklerden herhangi biri için pazarda iseniz, bir satın alma müzakeresi için ulaşmaktan çekinmeyin. Size her zaman en iyi ürün ve hizmetleri sunmaya hazırız.
Referanslar
- Snyder, LR, Kirkland, JJ ve Glajch, JL (2010). Pratik HPLC yöntem geliştirme. John Wiley & Sons.
- Hermanson, GT (2013). Biyokonjugat teknikleri. Akademik Basın.