Selam! FMOC tedarikçisi olarak - onun - aiB - oh tfa, saflaştırması için ters faz kromatografisi dünyasına derinlemesine dalıyorum. Ters faz kromatografisi, saflaştırma işlemindeki yöntem için bir Go'dur, ancak doğru yapmak biraz zor olabilir. Bu blogda, bu sürecin nasıl optimize edileceğine dair bazı ipuçlarını paylaşacağım.
Öncelikle, temelleri anlayalım. Ters faz kromatografisi, bileşikleri hidrofobikliğine göre ayırır. FMOC - onun - aiB - oh tfa durumunda, onu diğer safsızlıklardan etkili bir şekilde izole etmek istiyoruz. Ters faz kromatografisindeki sabit faz genellikle bir C18 kolonu gibi hidrofobiktir ve mobil faz, su ve asetonitril veya metanol gibi organik çözücüler gibi polar çözücülerin bir karışımıdır.
Doğru sütunu seçme
Sütun seçimi çok önemlidir. FMOC - HIS - AIB - OH TFA için, yüksek kaliteli bir C18 sütunu genellikle harika bir seçenektir. Kolonun uzunluğu ve çapı da önemlidir. Daha uzun bir sütun daha iyi ayrılma sağlayabilir, ancak analiz süresini artırabilir. Daha kısa bir sütun ise süreci hızlandırabilir, ancak bazı çözünürlükleri feda edebilir.
FMOC - onun - aiB - oh tfa arınma ile ilk başlarken, farklı C18 sütunları denedim. Bazı sütunlar daha yüksek bir karbon yüküne sahipti, bu da daha hidrofobik oldukları anlamına geliyordu. Bu, daha hidrofobik safsızlıkları korumak için harikaydı, ancak FMOC - HIS - AIB - OH TFA'nın kendisini tutmamaya dikkat etmeliydim.
Dikkate alınması gereken başka bir şey, kolon paketlemesinin parçacık boyutudur. Daha küçük parçacık boyutları genellikle daha iyi çözünürlük sağlar, ancak sistemdeki geri basıncını da artırabilir. Bu nedenle, kromatografi sisteminizin yeteneklerine dayalı bir denge bulmanız gerekir.
Mobil aşamayı optimize etmek
Mobil aşama, bileşiğinizi kolonda hareket ettiren "taşıyıcı" gibidir. Suyun organik çözücüye oranı önemli bir faktördür. FMOC - HIS - AIB - OH TFA için, bir gradyan elüsyonu sıklıkla kullanılır. Bu, daha yüksek bir su yüzdesi ile başlamak ve organik çözücünün yüzdesini kademeli olarak arttırmak anlamına gelir.
Genellikle yaklaşık% 90 su ve% 10 asetonitril olan bir mobil faz ile başlarım. Bu, önce daha fazla kutup safsızlıklarının Elute'ye izin verir. Asetonitril yüzdesini arttırdıkça, FMOC - HIS - AIB - OH TFA sütun boyunca hareket etmeye başlar. Organik çözücü yüzdesini artırma oranı önemlidir. Eğer çok hızlı bir şekilde arttırırsam, ayrılık yeterince iyi olmayabilir ve FMOC - HIS - AIB - OH TFA bazı safsızlıklarla ortaya çıkabilir. Çok yavaş artırırsam, analiz süresi çok uzun olacaktır.
Mobil aşamanın pH'ı da bir rol oynar. FMOC - HIS - AIB - OH TFA'nın asidik ve temel fonksiyonel grupları vardır, bu nedenle pH'ı ayarlamak yükünü ve hidrofobikliğini değiştirebilir. PH'ı kontrol etmek için genellikle fosfat tamponu gibi bir tampon kullanıyorum. 2 - 3 civarında bir pH, temel grupların protonlanmasına ve bileşiği daha hidrofobik hale getirmeye yardımcı olabileceğinden genellikle iyi bir başlangıç noktasıdır.
Sıcaklık kontrolü
Sıcaklık, ters faz kromatografisindeki ayrımı etkileyebilir. Genel olarak, sıcaklığın arttırılması, mobil fazın viskozitesini azaltabilir, bu da daha hızlı elüsyon sürelerine yol açabilir. Bununla birlikte, bileşiklerin tutma davranışını da değiştirebilir.
FMOC - HIS - AIB - OH TFA için, yaklaşık 25 - 30 ° C'lik bir sıcaklığın iyi çalıştığını buldum. Bu sıcaklıkta, ayırma iyidir ve analiz süresi makul. Sıcaklık çok yüksekse, bileşik bozulabilir ve çok düşükse, ayırma o kadar verimli olmayabilir.
Örnek Hazırlık
Uygun örnek hazırlama esastır. Her zaman FMOC - HIS - AIB - OH TFA örneğini uygun bir çözücü içinde çözdüğümden emin olurum. Bir su karışımı ve mobil fazda kullanılan organik çözücü genellikle iyi bir seçimdir. Bu, numunenin mobil faz ile uyumlu olmasını ve kromatografi sistemine sorunsuz bir şekilde enjekte edilebileceğinden emin olmaya yardımcı olur.
Ayrıca herhangi bir partikül maddeyi çıkarmak için enjeksiyondan önce numuneyi filtreliyorum. Bu, kolonun tıkanmasını önleyebilir ve kromatografi sistemini koruyabilir. 0.22 - mikron filtresi genellikle bu amaç için yeterlidir.
İzleme ve doğrulama
Saflaştırma işlemi sırasında kromatogramı izlemek önemlidir. Bileşiklerin elüsyonunu izlemek için bir UV dedektörü kullanıyorum. FMOC - HIS - AIB - OH TFA, ilerlemesini sütun boyunca izlememi sağlayan karakteristik bir UV absorpsiyon zirvesine sahiptir.
Saflaştırmadan sonra sonuçları doğrularım. Saflığını kontrol etmek için saflaştırılmış FMOC - HIS - AIB - OH TFA ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) kimliğini doğrulamak için kütle spektrometresi gibi teknikleri kullanıyorum. Saflık işarete bağlı değilse, geri dönüp kromatografi parametrelerini ayarlarım.
İlgili bileşikler ve bağlantılar
Bu arada, ilgili bileşiklerle ilgileniyorsanız,Octadecanedioik asit mono - tert - butil ester-Tbuo - o - gal (aoe - aoe) - otbue, VeFMOC - THR (TBU) - PHE - OH. Bu bileşikler farmasötik endüstrisinde de önemlidir ve araştırma veya üretiminizle ilgili olabilir.
Çözüm
FMOC - HIS - AIB - OH TFA'nın saflaştırılması için ters -faz kromatografisini optimize etmek sabır ve deney gerektiren bir süreçtir. Sütunu dikkatlice seçerek, mobil fazı optimize ederek, sıcaklığı kontrol ederek, numuneyi düzgün bir şekilde hazırlayarak ve sonuçları izleyerek ve doğrulayarak yüksek kaliteli saflaştırma elde edebilirsiniz.
FMOC - HIS - AIB - OH TFA için pazardaysanız veya saflaştırma süreci hakkında herhangi bir sorunuz varsa, bir tedarik tartışması için ulaşmaktan çekinmeyin. İhtiyaçlarınız için en iyi kaliteyi elde etmenize yardımcı olmak için buradayız.
Referanslar
- Snyder, LR, Kirkland, JJ ve Glajch, JL (2010). Pratik HPLC yöntem geliştirme. John Wiley & Sons.
- McMaster, MC (2006). Farmasötik bilim adamları için HPLC. Wiley - Interscience.